今日热点ATCC细胞培养方法几点

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　　（1）取成年新西兰大白兔，耳缘静脉注空气处死后，取下兔子的双腿，立即用75%乙醇浸泡。
　　
　　（2）移入细胞房内，去除双腿表面的皮毛及肌肉，剪取关节段，移至超菌工作台内。
　　
　　（3）PBS洗涤数次，用手术刀或弯剪将关节表面的软骨组织取下。
　　
　　（4）软骨组织块静置5min，弃去上层液体及悬浮组织，将软骨组织剪成1mm3的大小。移到离心管中加3倍体积的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化15-20min；
　　
　　（5） 4℃静置5min；弃上清，PBS洗涤，去上清。加入0.2%胶原酶II，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化2H；
　　
　　（6）加入生长培养基终止消化，反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液,1200rpm离心8min，弃上清，用DMEM完全培养基重新悬浮细胞, 放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
　　
　　（7）细胞传代后放入预置有薄骨片或盖玻片的培养板中进行培养。细胞完全展开后即可固定做原代鉴定。