谈谈：ATCC细胞细胞传代培养个步骤

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　　一、原理 　　细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 　　传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分 　　瓶。
　　
　　二、材料和试剂 　　1、细胞：贴壁细胞株 　　2、试剂：0.25%、1640培养基（含10%小牛血清） 　　3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
　　
　　、操作步骤 　　1、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 　　2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 　　3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将弃去，加入10ml培养液终止消化。 　　观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。 　　4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到瓶中，践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 　　附：消化液配制方法： 　　称取0.25克蛋白酶（活力为1：250），加入100mlCa2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。 　　溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。